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食安知識

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什么是膠體金,如何應用

發(fā)布時間:2020-08-11來源:冠宇儀器

     膠體金(colloidal gold),又稱金溶膠(gold solution),是指分散相粒子直徑在l—150nm之間的金溶膠,屬于多相不均勻體系,顏色呈桔紅色到紫紅色。膠體金可以作為標記物用于免疫組織化學,近10多年來膠體金標記已經(jīng)發(fā)展為一項重要的免疫標記技術(shù)。膠體金免疫分析在藥物檢測、生物醫(yī)學等許多領(lǐng)域的研究已經(jīng)得到發(fā)展,并越來越受到相關(guān)研究領(lǐng)域的重視。

    膠體金作為標記物用于免疫組織化學始于1971年,Faulk等應用電鏡免疫膠體金染色法(IGS)觀察沙門氏菌,此后他們把膠體金與多種蛋白質(zhì)結(jié)合.1974年Romano等將膠體金標記在第二抗體(馬抗人IgG)上,建立了間接免疫膠體金染色法。1978年geoghega發(fā)現(xiàn)了膠體金標記物在光鏡水平的應用。膠體金在免疫化學中的這種應用,又被稱為免疫金.之后,許多學者進一步證實膠體金能穩(wěn)定又迅速地吸附蛋白質(zhì),而蛋白質(zhì)的生物活性無明顯改變.它可以作為探針進行細胞表面和細胞內(nèi)多糖、蛋白質(zhì)、多肽、抗原、激素、核酸等生物大分子的精確定位,也可以用于日常的免疫診斷,進行免疫組織化學定位,因而在臨床診斷及藥物檢測等方面的應用已受到廣泛的重視.目前電鏡水平的免疫金染色(IGS),光鏡水平的免疫金銀染色(IGSS),以及肉眼水平的斑點免疫金染色技術(shù)日益成為科學研究和臨床診斷的有力工具.膠體性質(zhì)膠體金顆粒大小多在1~100nm,微小金顆粒穩(wěn)定地、均勻地、呈單一分散狀態(tài)懸浮在液體中,成為膠體金溶液。近10多年來膠體金標記已經(jīng)發(fā)展為一項重要的免疫標記技術(shù).膠體金免疫分析在藥物檢測、生物醫(yī)學等許多領(lǐng)域的研究已經(jīng)得到發(fā)展,并越來越受到相關(guān)研究領(lǐng)域的重視。

膠體金的應用:

1、膠體金在電鏡水平的應用。膠體金應用電鏡水平的研究最早,發(fā)展最快,應用最廣泛。其最大優(yōu)點是可以通過應用不同大小的顆?;蚪Y(jié)合酶標進行雙重或多重標記。直徑為3~15nm 膠體金均可用作電鏡水平的標記物。3~15nm 的膠體金多用于單一抗原顆粒的檢測,而直徑15nm 多用于檢測量較多的感染細胞。

膠體金用于電鏡水平的研究,主要包括:①細胞懸液或單層培養(yǎng)中細胞表面抗原的觀察。②單層培養(yǎng)中細胞內(nèi)抗原的檢測。③組織抗原的檢測。金標記在電鏡水平的應用,主要方法包括:包埋前染色、包埋后染色、免疫負染色、雙標記技術(shù)和原位雜交技術(shù)等。實驗證明,該法樣本用量少、檢測速度快、對比明顯、操作簡單、敏感性和特異性高,既可用于抗原檢測,也可用于抗體檢測,因此,可同時適用于科研和診斷。

2、膠體金在光鏡水平的應用。膠體金同樣可用做光鏡水平的標記物,取代傳統(tǒng)的熒光素、酶等。各種細胞涂片、切片均可應用。主要用于:①用單克窿抗體或抗血清檢測細胞懸液或培養(yǎng)的單層細胞的膜表面抗原。②檢測培養(yǎng)的單層細胞胞內(nèi)抗原,③組織中或亞薄切片中抗原的檢測。 膠體金用于光鏡水平的研究,可以彌補其它標記物不可避免的本底過高和內(nèi)部酶活性干擾等缺點。

3、膠體金在流式細胞儀中的應用。應用熒光素標記的抗體,通過流式細胞儀計數(shù)分析細胞表面抗原,是免疫學研究中的重要技術(shù)之一。但由于不同熒光素的光譜相互重疊,區(qū)分不同的標記困難,因此必須尋找一種非熒光素標記物,用于流式細胞計數(shù)。這樣可以同時進行幾種標記。該標記物必須能夠改變散射角,膠體金可以明顯地改變紅激光散射角,因而可以作為流式細胞儀的標記物之一。

4、凝集試驗:單分散的免疫金溶膠呈清澈透明的溶液,其顏色隨溶膠顆粒大小而變化,當與相應抗原或抗體發(fā)生專一性反應后出現(xiàn)凝聚,溶膠顆粒極度增大,光散射隨之發(fā)生變化,顆粒也會沉降,溶液的顏色變淡甚至變成無色,這一原理可定性或定量地應用于免疫反應。

5、免疫印跡技術(shù)(immunoblotting):免疫印跡是一種較新的免疫化學技術(shù)。用聚丙烯酰胺凝膠電泳將蛋白質(zhì)分離,得到的區(qū)帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜,然后用酶免疫法(或免疫熒光、RIA)進行定量。免疫膠體金也可用于該法的定量。轉(zhuǎn)移后的硝酸纖維素膜與某特異性的抗體保溫后,再與經(jīng)葡萄球菌A蛋白致敏的膠體金溫育,徹底洗去多余的膠體金,根據(jù)膜上膠體金顆粒顏色深淺可測知樣品中的特異性抗原。

利用金顆??纱呋y離子還原成金屬銀這一原理,采用銀顯影劑增強金顆粒的可見性,更可大大提高測定靈敏度,檢測下限可低至 0.1ng,這種免疫金銀染色法應用已日趨廣泛。由于膠體金免疫印跡技術(shù)簡便、快速,且有相當?shù)母叩撵`敏度,在臨床免疫診斷上有很大的應用潛力。

6、膠體金在肉眼水平的應用。膠體金取代傳統(tǒng)三大標記物,用于肉眼水平的免疫檢測中。除了膠體金本身具有的特點外,還有以下優(yōu)點:①試劑和樣本用量極小,樣本量可低至1~2ul;②不需γ-計數(shù)器、熒光顯微鏡、酶標檢測儀等貴重儀器,更適于現(xiàn)場應用; ③沒有諸如放射性同位素、鄰苯二胺等有害物質(zhì)參與;④實驗結(jié)果可以長期保存;⑤時間大大縮短,提高了檢測速度。金標過程中,無共價鍵形成,是一定離子濃度下的物理吸附。因此幾乎所有的大分子物質(zhì)都可被金標記,標記后大分子物質(zhì)活性不發(fā)生改變。實驗結(jié)果表明,膠體金的敏感性可達到 ELISA的水平。而結(jié)合銀染色時,檢測的敏感性更大大提高。

冠宇儀器膠體金檢測儀介紹:

   膠體金讀卡儀GY-610應用膠體金免疫層析技術(shù)的原理,通過反射光譜法測試CT線強弱程度可以檢測生化卡、金標卡及液態(tài)滴定模塊制成的獸藥、瘦肉精、抗生素、動物疫病、農(nóng)藥殘留、臨床疫病、水質(zhì)安全等

有毒有害物質(zhì)殘留項目:

1、真菌毒素殘留類(黃曲霉毒素、嘔吐毒素、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A等)

2、激素殘留類(萊克多巴胺、克倫特羅、沙丁胺醇、己烯雌酚等)

3、水產(chǎn)品安全類(呋喃妥因代謝、呋喃西林代謝、呋喃它酮代謝、呋喃唑酮代謝、孔雀石綠、氯霉素)

4、抗生素殘留類(磺胺、喹諾酮、喹乙醇等)

5、干式法試紙條食品有毒有害物質(zhì)、非法添加劑類、殘留類、水質(zhì)監(jiān)測項目等

6、臨床疾病類

膠體金檢測儀技術(shù)參數(shù):

測量原理:反射光譜測試

準確度:CV值≤3%

屏幕顯示:7英寸(支持定制10英寸)

系統(tǒng):ARM嵌入式系統(tǒng)(支持定制安卓)

檢測結(jié)果:半定量、定量檢測[GY-630型號支持定性(陰性、弱陽、陽性)]

打印功能:內(nèi)置熱敏打印機

通線方式:USB接口,RS232,網(wǎng)口(支持定制)、WIFI數(shù)據(jù)傳輸(定制)

溫度補償:內(nèi)置6通道37恒溫金屬浴

加密處理:ID卡讀取標準曲線(支持定制二維碼掃描)

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